激光共聚焦掃描顯微鏡主要有四部分(fēn)組成:1、顯微鏡光學系統。2、掃描裝置。3、激光光源。4、檢測系統。整套儀器由計算機控制,各部件之間的操作切換都可在計算機操作平台界面中(zhōng)方便靈活地進行。
1、顯微鏡光學系統
顯微鏡是顯微鏡的主要組件,它關系到系統的成象質量。顯微鏡光路以無限遠光學系統可方便地在其中(zhōng)插人光學選件而不影響成象質量和測量精度。物(wù)鏡應選取大(dà)數值孔徑平場複消色差物(wù)鏡,有利于熒光的采集和成象的清晰。物(wù)鏡組的轉換,濾色片組的選取,載物(wù)台的移動調節,焦平面的記憶鎖定都應由計算機自動控制。
2、掃描裝置
激光共聚焦掃描顯微鏡使用的掃描裝置在生(shēng)物(wù)領域一(yī)般爲鏡掃描。由于轉鏡隻需偏轉很小(xiǎo)角度就能涉及很大(dà)的掃描範圍,圖象采集速度大(dà)大(dà)提高,512×512畫面每秒可達4幀以上,有利于那些壽命短的離(lí)子作熒光測定。掃描系統的工(gōng)作程序由計算機自動控制。
3、激光光源
顯微鏡使用的激光光源有單激光和多激光系統。多激光器系統在可見光範圍使用多譜線氩離(lí)子激光器,發射波長爲457nm、488nm和514nm的藍(lán)綠光,氦氖綠激光器提供發射波長爲543nm的綠光,氦氖紅激光器發射波長爲633nm的紅光,新的405nm半導體(tǐ)激光器的出現可以提供近紫外(wài)譜線,但是小(xiǎo)巧便宜而且維護簡單。
4、檢測系統
激光共聚焦掃描顯微鏡爲多通道熒光采集系統,一(yī)般有三個熒光通道和一(yī)個透射光通道,能升級到四個熒光通道,可對物(wù)體(tǐ)進行多譜線激光激發,樣品發射熒光的探測器爲感光靈敏度高的光電(diàn)倍增管PMT,配有高速12位A/D轉換器,可以做光子計數。PMT前設置針孔,由計算機軟件調節針孔大(dà)小(xiǎo),光路中(zhōng)設有能自動切換的濾色片組,滿足不同測量的需要,也有通過光栅或棱鏡分(fēn)光後進行光譜掃描功能的設置。